Терапевтическая эффективность Фелиферона при вирусе иммунодефицита кошек

18.10.2017

Изучено влияние Фелиферона на показатели гемограммы, наличие провирусной ДНК ВИК в периферической крови, сроки купирования симптомов вторичных инфекций у кошек, больных ВИК. Применение Фелиферона в составе терапии ВИК-инфекции способствует эффективному снижению количества провирусной ДНК в клетках периферической крови, нормализует показатели ОАК и ускоряет сроки выздоровления от вторичных инфекций. Применение Фелиферона кошкам, больным ВИК, в составе комплексной терапии, безопасно и не сопровождается побочными эффектами и нежелательными явлениями.

Сокращения: АТ – антитело, БАК – биохимический анализ крови, ВИК – вирус иммунодефицита кошек, ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота, ИФА – иммуноферментный анализ, ОАК – общий анализ крови, ПЦР РВ – полимеразно-цепная реакция в режиме реального времени, РНК – рибонуклеиновая кислота

Введение

Вирус иммунодефицита кошек вызывает медленно прогрессирующее истощение иммунной системы, приводящее к ослаблению иммунитета, развитию вторичных инфекционных заболеваний и гибели животного [1]. Лечение основано на симптоматической терапии, при этом специфическую противовирусную терапию применяют крайне редко из-за неустановленных схем и высокой токсичности [1…3]. Целесообразно использовать видоспецифичный интерферон кошки, который имеет механизмы воздействия на ретровирусы [4, 5].

Установлено действие интерферона на ВИК посредством индуцирования синтеза белка APOBEC3 (белок, кодируемый одноименным геном, играющий важную роль во врожденном противовирусном иммунитете), который нарушает сборку вирусной РНК, вызывает образование дефектных вирусных частиц и тетерина – трансмембранного белка, ингибирующего перенос вириона из клетки во внешнюю среду [6, 7].

Цель исследования

Оценить безопасность и эффективность лекарственного препарата Фелиферон 400 000 МЕ/мл для кошек, больных ВИК.

Материалы и методы

В исследование включили 20 кошек в возрасте от 3 до 5 лет, которых разделили в случайном порядке на опытную и контрольную группу (n=10 в каждой). Кошки содержались в приюте для бездомных животных в одинаковых условиях. Диагноз ВИК-инфекции устанавливали с учетом данных анамнеза, клинического осмотра животного, совокупности положительных результатов ИФА на АТ к ВИК и ПЦР РВ на ДНК ВИК. Дифференциальный диагноз включал в себя исследование на парвовироз, коронавироз, вирусную лейкемию кошек, гемобартонеллез. Лабораторная диагностика проводилась в лаборатории «Айболит-лаб», Москва, ул. Болотниковская, д.21/1.

Эффективность и безопасность применения Фелиферона оценивали по результатам еженедельного клинического осмотра, включавшего в себя термометрию, аускультацию с подсчетом пульса и числа дыхательных движений в минуту, по срокам купирования симптомов вторичных инфекций, результатам ОАК и БАК, изменению качественного показателя ПЦР РВ с положительного на отрицательный. За животными вели наблюдение в течение 180 дней с момента начала эксперимента с целью контроля их состояния на предмет отдаленных нежелательных явлений. В таблице 1 приведен перечень лабораторных исследований по контрольным дням эксперимента.

Таблица 1. Перечень лабораторных анализов по контрольным дням эксперимента

Группа	День 0	День 14	День 45	День 180
Фелиферон	ОАК, БАК, ПЦР РВ, дифференциальная диагностика	ОАК, ПЦР РВ, БАК	ОАК, ПЦР РВ	ОАК, ПЦР РВ
Контроль

Статистическую оценку проводили с использованием непараметрических методик. Расчёты вели при помощи статистического пакета SigmaPlot 12.0. Статистическую значимость различий оценивали на уровне р<0,05.

Результаты и обсуждение

При оценке однородности групп по показателям массы тела, возраста, ОАК и БАК не выявлено статистически значимых отличий. Динамика изменения показателя ПЦР РВ на ДНК ВИК рандомизированных животных по экспериментальным группам представлена в таблице 2.

Таблица 2. Результаты исследований кошек методом ПЦР РВ на ДНК ВИК по контрольным дням эксперимента

Результат	Контроль эффективности				Контроль отдаленных нежелательных явлений
	День 0		День 14		День 45		День 180
	Фелиферон	Контроль	Фелиферон	Контроль	Фелиферон	Контроль	Фелиферон	Контроль
Положительный	10	10	2	10	5	9	0	8
Отрицательный	0	0	8	0	5	1	10	2

После окончания курса применения Фелиферона (14-й день) у 80 % животных опытной группы зарегистрирован отрицательный результат ПЦР РВ к ДНК ВИК в периферической крови и нормализация количества лимфоцитов. Учитывая тот факт, что провирусная ДНК обнаруживается при репродукции вируса в клетках периферической крови, отрицательный результат ПЦР РВ указывает на снижение количества ВИК в периферической крови до неопределяемого уровня. Следовательно, Фелиферон прерывает репродукцию вируса в клетках периферической крови, что в сочетании с нормализацией количества лимфоцитов является положительным клиническим эффектом.

По результатам ПЦР РВ на ДНК ВИК на 45-й день в опытной группе зарегистрировано 5 кошек с признаком виремии (положительный тест ПЦР РВ), в то время как в контрольной группе признак виремии выявлен у 9 из 10 животных. Данный результат указывает, по всей видимости, на ремиссию ВИК-инфекции по состоянию на 45-й день исследования у 50 % животных опытной группы, что обусловлено иммуностимулирующим эффектом и противовирусным действием препарата в отношении ВИК. Сравнение результатов ОАК после окончания курса лечения (на 14-й день исследования) выявило статистически значимые улучшения количества лейкоцитов, процентного содержания СЯ нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов в опытной группе (табл. 3).

Таблица 3. Показатели ОАК у рандомизированных животных экспериментальных групп на 14-й день

Показатели	Физиологическая норма [лаборатория «Айболит;лаб», г. Москва]	Наименование групп	День 0, M±m	День 14, M±m
Лейкоциты, 103/л	5,5…18,5	Фелиферон	9,85±3,15	16,15±3,94*
Лейкоциты, 103/л	5,5…18,5	Контроль	5,50±4,79	4,00±4,81
СЯ нейтрофилы, %	35…75	Фелиферон	72,00±10,45	69,00±12,52*
СЯ нейтрофилы, %	35…75	Контроль	74,50±7,18	74,00±9,87
Моноциты, %	1…4	Фелиферон	0,00	4,00±0,35*
Моноциты, %	1…4	Контроль	0,00	0,00
Лимфоциты, %	20…55	Фелиферон	19,00±6,67	25,00±2,25*
Лимфоциты, %	20…55	Контроль	16,00±5,42	14,00±1,67

У всех животных обеих групп на начало эксперимента количество лимфоцитов зарегистрировано близко к нижней границе нормы, что указывает на скрытое течение ВИК. После применения Фелиферона в опытной группе отмечено нарастание количества лимфоцитов с 9,85±3,15 до 16,15±3,94х103/л, в то время как в контрольной группе общее количество лимфоцитов опустилось за нижнюю границу нормы (с 5,50±4,79 до 4,00±4,81х103/л).

Показатель CЯ нейтрофилов указывает на тяжесть течения инфекционного заболевания. На начало эксперимента в обеих группах данный показатель достигал верхней границы нормы. После применения Фелиферона в опытной группе среднее количество СЯ нейтрофилов снизилось с 72±10,45 до 69±12,52 %, в то время как в контрольной группе данный показатель остался на прежнем уровне (на начало исследования 74,50±7,18; на 14-й день 74,00±9,87 %). У животных обеих групп по результатам входящего обследования отмечено полное исчезновение моноцитов из периферической крови.

Несмотря на то, что у кошек количество моноцитов в норме составляет от 1 до 4 %, полное исчезновение данных форменных элементов крови у всех экспериментальных кошек может служить весьма опасным признаком, указывающим на наличие тяжелых заболеваний, в том числе ВИК. В опытной группе при ОАК после применения Фелиферона выявлены моноциты в количестве 4,00±0,35 %, что служит благоприятным прогностическим признаком в отношении течения основного заболевания (ВИК) и вторичных инфекций. В контрольной группе моноциты не обнаруживались на 14-й день исследования. Основным маркером, указывающим на глубину поражения иммунной системы при ВИК, служат лимфоциты. У животных обеих групп их количество было ниже физиологической нормы. По окончании применения Фелиферона в опытной группе количество лимфоцитов статистически достоверно пришло в пределы нормы (с 19,00±6,67 до 25,00±2,25 %, при норме 20…55 %), в то время как в контрольной группе количество лимфоцитов снизилось с 16,00±5,42 до 14,00±1,67 %. Для лечения симптомов вторичных инфекций по окончании курса Фелиферона был применен ципрофлоксацин в дозе 5 мг/кг, 1 раз в день, 5 дней в обеих группах. Сроки клинического купирования симптомов сопутствующих инфекционных болезней представлены в таблице 4.

Таблица 4. Средние сроки купирования симптомов сопутствующих инфекционных болезней

Симптом	Исчезновение симптома, день
Симптом	опыт (Фелиферон + ципрофлоксацин)	Контроль (ципрофлоксацин)
Хронический конъюнктивит	3,33	4,3
Хронический ринит	4,50	5,14
Хроническая диарея	2,33	4,33

В группе с применением Фелиферона отмечены сокращенные средние сроки купирования симптомов вторичных инфекций (на 25 %) в сравнении с контролем. При анализе критериев безопасности применения Фелиферона не выявлено значимых изменений БАК у кошек опытной группы по окончании лечения.

Показатели ОАК в опытной группе на 45-й, 180-й день наблюдения имели отклонения от физиологической нормы, характерные для скрытого течения ВИК-инфекции. Применение Фелиферона не вызывало побочных эффектов и нежелательных явлений.

Заключение

Выявлена клиническая эффективность Фелиферона в терапии кошек, больных ВИК в стадии вторичных инфекций. Применение Фелиферона в составе терапии ВИК-инфекции способствует снижению репродукции вируса в клетках периферической крови, нормализует показатели ОАК и ускоряет сроки выздоровления от вторичных инфекций. Применение Фелиферона у кошек, больных ВИК, в составе комплексной терапии безопасно и не сопровождается побочными эффектами, нежелательными явлениями.

Рекомендуется применение Фелиферона в комплексной терапии кошек, больных ВИК, с целью замедления прогрессирования болезни и терапии вторичных инфекций кошек, больных ВИК, в суточной дозе 400 000 МЕ/гол, внутримышечно, с 1-го по 7-й день, далее на 9-й, 11-й, 13-й день, внутримышечно, один раз в день.

Работа выполнена при финансовой поддержке Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере, в рамках программы «Коммерциализация», Государственный контракт № 352ГКС4/16170 от 03.08.2015.

Библиография

1. Hartmann, K. Feline leukaemia virus infection / K. Hartmann // In: Greene, C.E. (Ed.), Infectious Diseases of the Dog and the Cat. — St. Louis: Saunders Elsevier, 2006. — pp. 105–131.

2.Dunham, S.P. Retroviral infections of small animals / S.P. Dunham, E. Graham // Vet. Clin. Small Anim. — 2008. — No. 38. — pp. 879–901.

3. Caney, S. Antiviral therapy in cats: current rationale and recommendations / S. Caney // In Pract. — 2005. — No. 27. — pp. 454–457.

4. Truyen, U. A study of the antiviral activity of interferon-omega (IFNw) against selected canine and feline viruses / U. Truyen, S. Blewaska, U. Schultheiss // J. Mod. Vet. Med. — 2002. — No. 10. — pp. 862–864.

5. Collado, V.M. Effect of type I interferons on the expression of feline leukaemia virus / V.M. Collado, E. Gуmez-Lucнa, G. Tejerizo, G. Mirу, E. Escolar, S. Martyn, A. Domenech // Vet. Microbiol. — 2007. — No. 123. — pp. 180–186.

6. Dietrich, I. Feline Tetherin Efficiently Restricts Release of Feline Immunodeficiency Virus but Not Spreading of Infection / I. Dietrich, E.L. McMonagle et al. // Journal of virology. — 2011 June. — pp. 5840–5852.

7. Zhang, Z. Determinants of FIV and HIV Vif sensitivity of feline APOBEC3 restriction factors / Zeli Zhang, Gu Qinyong et al. // Retrovirology. — 2016. — No. 13. — pp. 46.